ABSTRAK Semakin tinggi jumlah populasi manusia menyebabkan semakin tinggi pula nilai kebutuhan pada masyarakat tersebut. Salah satu kebutuhan pokok masyarakat yaitu air bersih. Air bersih tersebut sangat banyak digunakan untuk memenuhi kebutuhan salah satunya sebagai air minum yang layak konsumsi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kualitas mikrobiologi pada air minum isi ulang di RW 009 Kampung Ambon Kelurahan Kayu Putih Jakarta Timur. Penelitian ini menggunakan metode deskriptif dengan uji Most Probable Number (MPN).Metode MPN terdiri dari uji penduga dengan media Lactose Broth Double Strength (LBDS) dan Lactose Broth Single Strength (LBSS), uji penguat dengan media Brillian Green Lactose Broth (BGLB), dan uji pelengkap dengan media Eosin Methylene Blue Agar (EMB agar). Hasil penelitian yang diharapkan sampel air minum isi ulang di RW 009 Kampung Ambon Kelurahan Kayu Putih Jakarta Timur memenuhi persyaratan kualitas mikrobiologi berdasarkan PERMENKES No 492 Tahun 2010 dan tidak adanya cemaran bakteri Escherichia coli.